PAR-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420267

Descripción general

El gen F2rl3 del ratón codifica el receptor activado por proteasas 4 (PAR-4), un receptor acoplado a proteína G que es activado por proteasas de serina como la trombina mediante el desenmascaramiento proteolítico de un ligando anclado. PAR-4 se acopla principalmente a las vías de señalización de Gq y G12/13 para impulsar la movilización intracelular de Ca2+, la remodelación del citoesqueleto dependiente de RhoA/ROCK y las respuestas posteriores de las rutas MAPK y NF-κB, que modulan la activación plaquetaria, la señalización inflamatoria y la homeostasis vascular. En contextos inmunitarios y vasculares, la actividad de F2rl3/PAR-4 contribuye a la adhesión celular y a la regulación de la barrera, y se estudia con frecuencia en modelos de trombosis, inflamación y estrés cardiometabólico. La alteración de la señalización de PAR-4 también se ha vinculado a señales del microambiente asociado a tumores, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos sobre el diálogo cruzado entre hemostasia e inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen F2rl3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del F2rl3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de F2rl3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAR-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en F2rl3 para la investigación de la señalización de PAR-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de F2rl3 críticos para la función de PAR-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de F2rl3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PAR-4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PAR-4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus F2rl3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAR-4 (m) y el plásmido HDR PAR-4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología F2rl3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana F2rl3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.