Plásmido Doble Nickase (h) PAR-3: sc-417018-NIC

F2RL2 codifica el receptor activado por proteasas 3 (PAR-3), un receptor acoplado a proteínas G sensible a la trombina que modula la señalización plaquetaria y las respuestas de las células vasculares mediante una activación proteolítica regulada. PAR-3 influye en las vías hemostáticas e inflamatorias al modelar redes de señalización aguas abajo de los GPCR, incluida la movilización de calcio y las cascadas de quinasas que convergen con la activación celular impulsada por la coagulación. En humanos, la alteración de la señalización de la familia PAR se ha asociado con trombosis desregulada, inflamación vascular e interacciones tumor–estroma, lo que convierte a F2RL2 en una diana relevante para estudios mecanísticos de la señalización por proteasas. El análisis de la función de PAR-3 permite investigar el “cross-talk” entre proteasas, GPCR y señales de la matriz extracelular en microambientes relevantes para la enfermedad.

PAR-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus F2RL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de F2RL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de F2RL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con F2RL2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.