PAPP-A2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-412949-LAC

PAPPA2 kodiert das schwangerschaftsassoziierte Plasmaprotein A2 (PAPP-A2), eine sezernierte Metalloproteinase, die Insulin-like Growth Factor Binding Proteins spaltet, insbesondere IGFBP-3 und IGFBP-5. Dadurch erhöht sie die lokale Bioverfügbarkeit von IGF und moduliert die IGF/PI3K-AKT- sowie MAPK-Signalübertragung. Über die Kontrolle des Zugangs von IGF-Liganden beeinflusst PAPP-A2 Zellwachstum, Differenzierung und von der extrazellulären Mikroumgebung abhängige Antworten in mehreren Geweben. Genetische und funktionelle Studien bringen eine Fehlregulation von PAPPA2 mit veränderten Wachstumsphänotypen und endokrinbezogenen Merkmalen in Verbindung, die mit einem Ungleichgewicht der IGF-Achse zusammenhängen, was es für Untersuchungen zu Entwicklung, Stoffwechsel und Gewebeumbau relevant macht. Seine extrazelluläre proteolytische Aktivität verknüpft PAPPA2 zudem mit Studien zur Proteasebiologie und zur Regulation sezernierter Signalwege in physiologischen und krankheitsassoziierten Kontexten.

PAPP-A2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PAPPA2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PAPP-A2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PAPPA2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PAPP-A2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PAPPA2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.