Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PAP-β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403907
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PAP-β El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PAP-β, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PAP-β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403907 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PAPOLB codifica la polimerasa poli(A) beta (PAP-β), una enzima de poliadenilación no canónica con expresión enriquecida en células germinales masculinas, que respalda el control postranscripcional durante la espermatogénesis. Al extender las colas poli(A) de determinados ARNm, PAP-β influye en la estabilidad de los transcritos, la exportación nuclear y la activación de la traducción, integrándose con redes más amplias de procesamiento de ARN y vigilancia del ARNm. La alteración de la actividad de PAPOLB se ha vinculado a defectos en el desarrollo espermático y a fenotipos de fertilidad reducida, lo que la hace relevante para estudios de regulación génica en la línea germinal. PAPOLB también ofrece un modelo para analizar cómo polimerasas poli(A) especializadas moldean programas de expresión génica específicos de cada etapa.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PAP-β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PAPOLB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PAPOLB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PAPOLB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PAP-β.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PAPOLB para la investigación de la señalización de PAP-β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PAPOLB críticos para la función de PAP-β
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PAPOLB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PAP-β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PAP-β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PAPOLB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PAP-β (h) y el plásmido HDR PAP-β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PAPOLB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PAPOLB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.