Plásmido CRISPR de Activación (h) PAK5: sc-404073-ACT

PAK5 (quinasa 5 activada por p21; PAK7) es una quinasa de serina/treonina y un efector downstream de las GTPasas de la familia Rho, como CDC42 y RAC1, que regula la remodelación del citoesqueleto, la polaridad celular y las señales de supervivencia. En células humanas, PAK5 influye en la dinámica de la actina y la estabilidad de los microtúbulos, dando forma a procesos como el crecimiento de neuritas, la migración y el tráfico vesicular. Interactúa con redes asociadas a MAPK/ERK y PI3K/AKT, y puede modular la fosforilación de sustratos que coordinan la adhesión y la motilidad. Se ha descrito una expresión o señalización desregulada de PAK5 en múltiples contextos tumorales, y también es relevante en neurobiología por sus funciones en el desarrollo neuronal y la función sináptica.

PAK5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAK5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PAK5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAK5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAK5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PAK5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAK5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PAK5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PAK5 en células tumorales con expresión de PAK5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.