PAFAH1B3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422104

Panoramica

Pafah1b3 codifica per la subunità catalitica PAFAH1B3, una fosfolipasi dipendente dalla serina che idrolizza il fattore di attivazione piastrinica e fosfolipidi bioattivi correlati. Modulando i secondi messaggeri lipidici, PAFAH1B3 contribuisce all’omeostasi di membrana e influenza a valle la segnalazione infiammatoria, le risposte allo stress e le vie di rimodellamento metabolico. Alterazioni dell’attività di PAFAH1B3 sono state associate a cambiamenti nella composizione lipidica cellulare e in programmi legati alla proliferazione, a supporto della sua rilevanza negli studi sul metabolismo delle cellule tumorali e sulla regolazione immunitaria. Nei modelli murini, Pafah1b3 rappresenta un punto di ingresso facilmente sfruttabile per indagare il catabolismo dei fosfolipidi e il suo impatto sulla fisiologia tissutale e sulla segnalazione lipidica associata alle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAFAH1B3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pafah1b3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pafah1b3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pafah1b3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAFAH1B3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pafah1b3 per lo studio della segnalazione di PAFAH1B3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pafah1b3 critici per la funzione di PAFAH1B3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pafah1b3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAFAH1B3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pafah1b3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAFAH1B3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAFAH1B3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pafah1b3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pafah1b3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.