Partículas Lentivirales de Activación (h) PAF acetylhydrolase 2: sc-410924-LAC

PAFAH2 codifica el factor activador de plaquetas acetilhidrolasa 2 (PAF-AH2), una fosfolipasa intracelular que hidroliza el grupo acetilo en sn-2 del factor activador de plaquetas (PAF) y de fosfolípidos oxidados relacionados, modulando así la disponibilidad de mediadores lipídicos y la homeostasis de los lípidos de membrana. Al limitar las especies bioactivas tipo PAF, PAFAH2 influye en la señalización inflamatoria, las respuestas al estrés oxidativo y procesos posteriores como la producción de citocinas, la apoptosis y la adaptación celular al estrés. La alteración en el manejo de fosfolípidos oxidados y en la señalización del PAF se ha asociado con fenotipos inflamatorios y contextos de lesión tisular, lo que convierte a PAFAH2 en un nodo útil para estudiar la señalización impulsada por lípidos y las vías reguladas por el estado redox. La modulación experimental de PAFAH2 respalda estudios mecanísticos en inmunología, biología vascular y modelos de estrés metabólico, donde el recambio de fosfolípidos afecta la función celular.

Las partículas de activación lentiviral PAF acetylhydrolase 2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PAFAH2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PAF acetylhydrolase 2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PAFAH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PAF acetylhydrolase 2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PAFAH2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.