Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PACAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437378
- Specie Target: rat
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PACAP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PACAP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PACAP Antibody (F-2): sc-166180
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PACAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r) | sc-437378 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il polipeptide attivante l’adenilato ciclasi ipofisaria (PACAP; Adcyap1) è un neuropeptide conservato che segnala principalmente attraverso il recettore PAC1 e può anche attivare i recettori VPAC per regolare la trascrizione dipendente da cAMP/PKA e da MAPK/ERK. Nei sistemi nervoso e neuroendocrino del ratto, PACAP modula l’eccitabilità neuronale, il rilascio di neurotrasmettitori, la segnalazione dell’asse dello stress e programmi di sviluppo che includono la crescita dei neuriti e la sopravvivenza cellulare. La segnalazione indotta da PACAP interseca l’omeostasi del calcio, la plasticità sinaptica e la regolazione dei mediatori dell’infiammazione, collegando questa via a meccanismi rilevanti per l’elaborazione del dolore, i comportamenti correlati allo stress e la neuroinfiammazione. Un’attività di PACAP deregolata è stata associata ad alterazioni del controllo autonomico e metabolico ed è stata studiata in modelli con fenotipi simili all’emicrania e con vulnerabilità neurodegenerativa.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PACAP (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PACAP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di PACAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di PACAP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PACAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal PACAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PACAP Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR PACAP (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.