PAC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401917

Übersicht

Dual-Specificity-Phosphatase 2 (DUSP2), auch als PAC-1 bekannt, ist eine MAP-Kinase-Phosphatase, die aktiviertes ERK1/2 und p38 dephosphoryliert und dadurch Stärke und Dauer der MAPK-Signalübertragung mitbestimmt. In immunologischen und hämatopoetischen Kontexten des Menschen trägt DUSP2 zur stimulusabhängigen Kontrolle zytokingetriebener Transkriptionsprogramme, von Proliferation und Apoptose bei, indem es als negativer Feedback-Regulator von MAPK-Kaskaden wirkt. Seine Expression ist in aktivierten Lymphozyten häufig induzierbar und kann nachgeschaltete Signalwege modulieren, die mit Entzündungssignalen und Stressantworten verknüpft sind. Eine Fehlregulation der DUSP2-Aktivität oder -Expression wurde mit Immunfunktionsstörungen und krebsassoziierten Signalphänotypen in Verbindung gebracht, was DUSP2 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Kontrolle des MAPK-Signalwegs macht.

Das PAC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUSP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUSP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUSP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAC-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUSP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAC-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUSP2-Exone abzielen, die für die PAC-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUSP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PAC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUSP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAC-1 HDR-Plasmid (h) und PAC-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUSP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUSP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.