PABP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422100

Descripción general

Pabpc1 de ratón codifica la proteína de unión a poli(A) (PABP), un regulador central del destino del ARNm citoplasmático que se une a las colas poli(A) y coordina el inicio de la traducción, la estabilización del ARNm y la degradación dependiente de la deadenilación. Mediante interacciones con eIF4G y otras proteínas de unión a ARN, PABP ayuda a acoplar la longitud de la cola poli(A) al reclutamiento de ribosomas y favorece una síntesis proteica eficiente durante el crecimiento, la diferenciación y las respuestas al estrés. PABP también contribuye a programas de control postranscripcional implicados en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y las respuestas antivirales innatas, lo que convierte a Pabpc1 en un nodo relevante en estudios sobre expresión génica desregulada. La alteración de redes reguladoras de ARNm dependientes de PABP se examina con frecuencia en el contexto de programas de traducción oncogénicos y de fenotipos del neurodesarrollo o neurodegenerativos impulsados por un metabolismo del ARN alterado.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PABP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pabpc1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pabpc1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pabpc1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PABP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pabpc1 para la investigación de la señalización de PABP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pabpc1 críticos para la función de PABP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pabpc1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PABP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PABP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pabpc1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PABP (m) y el plásmido HDR PABP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pabpc1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pabpc1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.