Plásmido CRISPR de Activación (h) p70 S6 kinase/S6K1: sc-400162-ACT

RPS6KB1 codifica la quinasa S6 p70 (S6K1), una quinasa de serina/treonina que actúa aguas abajo de la señalización PI3K–AKT–mTOR para regular la síntesis de proteínas, el crecimiento celular y la homeostasis metabólica. S6K1 fosforila la proteína ribosomal S6 y otros sustratos que coordinan la traducción del ARNm, la biogénesis ribosomal y el control por retroalimentación de la señalización de la insulina y de los factores de crecimiento. Mediante la integración de señales nutricionales y mitogénicas, RPS6KB1 contribuye a la progresión del ciclo celular, la supervivencia y programas de traducción adaptativos al estrés. La actividad desregulada del eje mTOR–S6K1 se estudia con frecuencia en contextos de señalización oncogénica, trastornos metabólicos y reconfiguración de vías de crecimiento asociada a resistencia.

p70 S6 kinase/S6K1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS6KB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p70 S6 kinase/S6K1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS6KB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS6KB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p70 S6 kinase/S6K1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS6KB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p70 S6 kinase/S6K1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p70 S6 kinase/S6K1 en células tumorales con expresión de RPS6KB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.