p68 RNA Helicase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402401

Descripción general

DDX5 codifica la helicasa de ARN p68, una helicasa de ARN dependiente de ATP de la familia DEAD-box que remodela el ARN y los complejos de ribonucleoproteínas para controlar el empalme (splicing) del pre-ARNm, la biogénesis de ribosomas y el procesamiento de microARN. p68 también actúa como correagulador transcripcional al interactuar con factores de transcripción sensibles a señales, conectando el metabolismo del ARN con programas de expresión génica que gobiernan la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés. A través de estas actividades, DDX5 contribuye al mantenimiento de la integridad del genoma y a la coordinación de las respuestas al daño del ADN con el procesamiento del ARN. La desregulación de la expresión o la función de DDX5 se ha asociado con redes transcripcionales oncogénicas y con paisajes de splicing de ARN alterados en múltiples contextos tumorales, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos de enfermedad impulsados por el ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO p68 RNA Helicase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDX5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDX5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDX5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína p68 RNA Helicase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDX5 para la investigación de la señalización de p68 RNA Helicase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDX5 críticos para la función de p68 RNA Helicase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDX5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido p68 RNA Helicase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDX5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR p68 RNA Helicase (h) y el plásmido HDR p68 RNA Helicase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDX5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDX5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.