Partículas Lentivirales de Activación (m) p54/nrb: sc-424729-LAC
- Especies Diana: mouse
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) p54/nrb es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (m) p54/nrb incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el p54/nrb Plásmido de activación lentiviral (m) y el p54/nrb Plásmido de activación lentiviral (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor Nono. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p54/nrb Anticuerpo (F-5): sc-376804
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (m) p54/nrb | sc-424729-LAC | 200 µl | $455.00 |
El gen **Nono** de ratón codifica **p54/nrb (NONO)**, una proteína nuclear multifuncional de la familia **DBHS** que se une a ARN y ADN y que forma heterodímeros con **SFPQ/PSPC1** para organizar los **paraspeckles** y coordinar la transcripción, el *splicing* del pre-ARNm y la retención de ARN. p54/nrb participa en la respuesta y reparación del daño en el ADN, incluyendo funciones en la **unión de extremos no homólogos (NHEJ)**, y ayuda a acoplar la transcripción dependiente de señales al procesamiento del ARN mediante interacciones con complejos asociados a la **ARN polimerasa II**. A través de la regulación de programas de expresión génica que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés, la actividad alterada de NONO se ha vinculado a la inestabilidad genómica y a redes transcripcionales aberrantes relevantes para el cáncer y fenotipos del neurodesarrollo. Como andamiaje para ensamblajes de ribonucleoproteínas, p54/nrb también influye en la dinámica de los cuerpos nucleares y en la regulación mediada por ARN largos no codificantes, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la organización nuclear.
Las partículas de activación lentiviral p54/nrb (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Nono en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral p54/nrb (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Nono, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de p54/nrb. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Nono y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.