Particules Lentivirales d'Activation (m) p53: sc-423509-LAC

Trp53 chez la souris code le facteur de transcription p53, un régulateur central des réponses au stress cellulaire qui coordonne la signalisation des dommages à l’ADN, l’arrêt du cycle cellulaire, la sénescence et l’apoptose. p53 intègre des signaux issus des voies ATM/ATR–CHK et est modulé par l’axe MDM2 afin de maintenir la stabilité génomique grâce au contrôle transcriptionnel de cibles impliquées dans la réparation, le métabolisme et l’homéostasie rédox. La perturbation ou l’atténuation de la fonction de Trp53 est fortement associée à la transformation oncogénique et à des réponses altérées au stress génotoxique, faisant de p53 un nœud central des réseaux de suppresseurs de tumeur. Dans les modèles murins, Trp53 est largement utilisé pour étudier les mécanismes d’initiation du cancer, les voies de résistance aux traitements et le maintien du génome dans différents tissus.

Les particules d'activation lentivirales p53 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Trp53 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales p53 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Trp53, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de p53. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Trp53 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.