P4HA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405566

Descripción general

P4HA2 codifica la subunidad catalítica alfa-2 de la prolil 4-hidroxilasa, una enzima clave del retículo endoplásmico necesaria para la hidroxilación de residuos de prolina en el colágeno y otras proteínas de la matriz extracelular. Esta modificación postraduccional favorece el plegamiento adecuado y la estabilidad de la triple hélice, vinculando la actividad de P4HA2 con la biosíntesis de colágeno, el control de calidad de proteínas en el RE y la organización de la matriz extracelular. A través de su papel en el depósito y la remodelación de la matriz, P4HA2 se estudia con frecuencia en vías relacionadas con las interacciones célula–matriz, la rigidez tisular y la regulación del comportamiento celular por el microambiente. La expresión desregulada de P4HA2 se ha asociado con remodelación fibrótica y cambios estromales asociados a tumores, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por la matriz.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P4HA2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P4HA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P4HA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P4HA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P4HA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P4HA2 para la investigación de la señalización de P4HA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de P4HA2 críticos para la función de P4HA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P4HA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P4HA2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P4HA2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P4HA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P4HA2 (h) y el plásmido HDR P4HA2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P4HA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P4HA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.