Plásmido CRISPR de Activación (m) p38 gamma MAPK12: sc-424361-ACT

Mapk12 codifica p38 gamma (MAPK12), una proteína quinasa activada por estrés de la familia de las quinasas activadas por mitógenos (MAPK) que integra señales extracelulares para regular programas transcripcionales que controlan la diferenciación, el metabolismo y la supervivencia celulares. p38 gamma participa en redes de señalización MAPK aguas abajo de citocinas inflamatorias y del estrés ambiental, influyendo en cascadas de fosforilación que moldean la expresión génica y la dinámica del citoesqueleto. En sistemas murinos, la actividad de MAPK12 se ha vinculado a respuestas específicas de tejido en el músculo esquelético y a la señalización relevante para el sistema inmunitario, lo que la hace útil para estudiar la adaptación al estrés y la comunicación cruzada entre quinasas dependiente del contexto. La desregulación de la vía p38 se examina con frecuencia en modelos de inflamación, desequilibrio metabólico y reprogramación de la señalización asociada al cáncer, donde MAPK12 puede actuar como un nodo que modula la amplitud y la especificidad de la vía.

p38 gamma MAPK12 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mapk12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p38 gamma MAPK12 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mapk12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mapk12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p38 gamma MAPK12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mapk12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p38 gamma MAPK12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p38 gamma MAPK12 en células tumorales con expresión de Mapk12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.