Particules Lentivirales d'Activation (m) P2Y9: sc-429620-LAC

Lpar4 code pour le récepteur 4 de l’acide lysophosphatidique (souvent désigné P2Y9), un RCPG qui détecte l’acide lysophosphatidique extracellulaire et transmet des signaux via des protéines G hétérotrimériques afin de réguler l’AMPc, le calcium intracellulaire et l’activité de la voie MAPK/ERK. Dans les cellules de souris, LPAR4/P2Y9 influence le remodelage du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et le comportement migratoire, en s’intégrant à des réseaux plus larges de signalisation par médiateurs lipidiques qui façonnent le développement tissulaire et la communication immuno‑stromale. Une dérégulation de la signalisation LPA–LPAR a été associée au remodelage inflammatoire, à des perturbations métaboliques et à des signaux du microenvironnement tumoral, ce qui fait de Lpar4 un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes cellulaires pilotés par les RCPG. Cette cible est fréquemment étudiée pour relier la signalisation lipidique à des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la fonction barrière et la différenciation.

Les particules d'activation lentivirales P2Y9 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Lpar4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales P2Y9 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Lpar4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de P2Y9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Lpar4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.