Plásmido CRISPR de Activación (m) P2Y9: sc-429620-ACT

El gen murino **Lpar4** codifica el receptor purinérgico acoplado a proteína G **P2Y9**, un sensor de superficie celular de nucleótidos extracelulares que se acopla a proteínas G heterotriméricas para modular la señalización de segundos mensajeros. La actividad de P2Y9 puede influir en vías dependientes de GPCR, como la movilización de calcio dependiente de fosfolipasa C, la regulación del AMPc y la señalización MAPK/ERK aguas abajo, moldeando así la comunicación celular, la migración y las respuestas inflamatorias. Dado que la señalización por nucleótidos está estrechamente vinculada al estrés tisular y a la activación inmunitaria, las alteraciones en la señalización de P2Y9/Lpar4 son relevantes para estudios sobre inflamación, regulación vascular y metabólica, y cambios de señalización del microambiente observados en la biología de enfermedades.

P2Y9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Lpar4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

P2Y9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Lpar4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Lpar4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de P2Y9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Lpar4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de P2Y9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía P2Y9 en células tumorales con expresión de Lpar4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.