Plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y2 (m): sc-422096

Présentation

P2ry2 code le récepteur murin P2Y2, un récepteur purinergique couplé aux protéines G activé par l’ATP et l’UTP extracellulaires. La signalisation de P2Y2 se couple principalement à Gq/11 pour stimuler la phospholipase C, la production d’inositol phosphates, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et l’activation en aval des voies MAPK et PI3K/AKT, modulant ainsi des réponses transcriptionnelles et cytosquelettiques. En régulant le transport ionique, la chimiotaxie et la sécrétion, P2Y2 contribue à la physiologie de la barrière épithéliale, aux réponses endothéliales et à la signalisation de l’immunité innée dans des microenvironnements inflammatoires. Une signalisation purinergique dérégulée impliquant P2Y2 a été associée à l’inflammation des voies aériennes et de l’intestin, à un remodelage lié à la fibrose, ainsi qu’à des interactions stromales et immunitaires associées aux tumeurs, ce qui étaye sa pertinence pour les études des mécanismes de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P2ry2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P2ry2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P2ry2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P2Y2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P2ry2 pour l'étude de la signalisation de P2Y2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P2ry2 essentiels à la fonction de P2Y2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P2ry2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P2Y2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le P2Y2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus P2ry2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P2Y2 plasmide HDR (m) et le P2Y2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P2ry2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P2ry2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.