P2Y1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401759

Descripción general

P2RY1 codifica el receptor humano P2Y1, un receptor purinérgico acoplado a proteína G que se activa principalmente por ADP extracelular para iniciar la señalización Gq/PLCβ, la movilización de Ca2+ mediada por IP3 y las respuestas posteriores de las vías PKC/MAPK. P2Y1 contribuye a la regulación de la activación y agregación plaquetarias, del tono vascular y de la comunicación intercelular en contextos endoteliales y asociados al sistema inmunitario mediante la detección de nucleótidos. En el sistema nervioso, la señalización de P2Y1 puede modular la actividad glial y la dinámica de las redes sinápticas, conectando señales purinérgicas con procesos inflamatorios y neuromoduladores. La actividad desregulada de P2RY1 se ha asociado con fenotipos trombóticos y cardiovasculares, y se estudia en el contexto más amplio de la neuroinflamación y de la señalización del microambiente tumoral, donde los nucleótidos extracelulares moldean el comportamiento celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P2Y1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P2RY1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P2RY1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P2RY1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P2Y1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P2RY1 para la investigación de la señalización de P2Y1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de P2RY1 críticos para la función de P2Y1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P2RY1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P2Y1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P2Y1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P2RY1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P2Y1 (h) y el plásmido HDR P2Y1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P2RY1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P2RY1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.