P2X7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400780-ACT

ヒトP2RX7は、ATPによって開口するイオンチャネルP2X7をコードしており、免疫細胞およびグリア細胞において、陽イオンのフラックス、膜脱分極、ならびに持続的なポア形成を調節する三量体のプリン作動性受容体である。P2X7シグナル伝達は、細胞外ATPの感知をインフラマソーム活性化、サイトカイン放出、そして制御された細胞死プログラムへと結び付け、NF-κB、MAPK、NLRP3駆動性の炎症経路と統合される。P2X7活性の変化は、神経炎症の制御異常、慢性炎症状態、腫瘍―免疫微小環境のリモデリングと関連づけられており、無菌性炎症やストレスシグナル伝達を研究する上で有用な結節点となる。強い機能的読み出しを持つ細胞表面受容体であることから、P2RX7はマクロファージ活性化モデル、ミクログリア応答、プリン作動性シグナル伝達ダイナミクスの解析において頻繁に検討されている。

P2X7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性P2RX7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

P2X7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における P2RX7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はP2RX7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性P2X7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のP2RX7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるP2X7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびP2RX7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるP2X7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。