Plásmido Doble Nickase (m) P2X3: sc-432763-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)P2X3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa P2X3 (m) y el plásmido de doble nickasa P2X3 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a P2rx3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: P2X3 Anticuerpo (B-5): sc-390572
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) P2X3 | sc-432763-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2rx3 codifica el receptor P2X3, un canal catiónico trimérico activado por ATP, enriquecido en neuronas sensoriales periféricas, donde media corrientes despolarizantes rápidas en respuesta a nucleótidos extracelulares. La actividad de P2X3 regula la entrada de Ca2+ y Na+, modulando la neurotransmisión nociceptiva y la inflamación neurogénica, y se integra en redes de señalización purinérgica que influyen en la excitabilidad, la transmisión sináptica y la plasticidad de las neuronas sensoriales. En modelos murinos, la alteración de la función de P2rx3 se ha vinculado a mecanismos subyacentes a estados de dolor inflamatorio y neuropático, así como a vías sensoriales viscerales relevantes para reflejos vesicales y de las vías respiratorias. Esta diana se utiliza ampliamente para estudiar la señalización inducida por ATP en los ganglios de la raíz dorsal, neuronas trigeminales y circuitos sensoriales relacionados.
P2X3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus P2rx3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de P2rx3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de P2rx3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con P2rx3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.