Plasmide Double Nickase (m) P2X3: sc-432763-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) P2X3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P2X3 Double Nickase (m) et le plasmide P2X3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant P2rx3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: P2X3 Antibody (B-5): sc-390572
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) P2X3 | sc-432763-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2rx3 code le récepteur P2X3, un canal cationique trimérique activé par l’ATP, enrichi dans les neurones sensoriels périphériques où il médie des courants dépolarisants rapides en réponse aux nucléotides extracellulaires. L’activité de P2X3 régule l’entrée de Ca2+ et de Na+, modulant la neurotransmission nociceptive et l’inflammation neurogène, et s’intègre aux réseaux de signalisation purinergique qui influencent l’excitabilité, la transmission synaptique et la plasticité des neurones sensoriels. Dans des modèles murins, une altération de la fonction de P2rx3 a été associée à des mécanismes impliqués dans les états douloureux inflammatoires et neuropathiques ainsi qu’à des voies sensorielles viscérales pertinentes pour les réflexes vésicaux et des voies aériennes. Cette cible est largement utilisée pour disséquer la signalisation induite par l’ATP dans les ganglions de la racine dorsale, les neurones trigéminés et les circuits sensoriels apparentés.
P2X3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus P2rx3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de P2rx3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de P2rx3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de P2rx3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.