Plasmide CRISPR d'Activation (h) p21-ARC: sc-403677-ACT

ARPC3 code p21-ARC, une sous-unité essentielle du complexe Arp2/3, qui amorce des réseaux ramifiés de filaments d’actine afin de favoriser la formation de lamellipodes, la protrusion membranaire et la génération de forces lors de la migration cellulaire. Grâce à une régulation coordonnée par les GTPases de la famille Rho et par des facteurs promoteurs de nucléation tels que les familles WAVE et WASP, p21-ARC soutient des processus dépendants de l’actine, notamment l’endocytose, la phagocytose, le trafic vésiculaire et l’organisation de la synapse immunologique. La perturbation du remodelage du cytosquelette médié par Arp2/3 influence la morphogenèse épithéliale, la croissance neuritique et la motilité des leucocytes, reliant l’activité d’ARPC3 à des mécanismes couramment exploités dans la biologie de l’invasion et des métastases. En tant que régulateur central de l’actine, ARPC3 est fréquemment étudié dans les voies contrôlant la forme cellulaire, le renouvellement des adhésions et la mécanotransduction, en conditions normales comme dans des contextes pathologiques.

p21-ARC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARPC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p21-ARC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARPC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARPC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p21-ARC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARPC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p21-ARC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p21-ARC dans les cellules tumorales présentant une expression de ARPC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.