Plasmide CRISPR/Cas9 KO p107 (m): sc-422614

Présentation

La protéine p107, codée chez la souris par le gène Rbl1, appartient à la famille du rétinoblastome et agit comme régulateur du cycle cellulaire en freinant la transition G1/S par sa liaison aux facteurs de transcription E2F et la coordination de la signalisation des kinases dépendantes des cyclines. p107 intègre les signaux mitogènes au contrôle transcriptionnel de la réplication de l’ADN et de l’entrée en phase S, et contribue à l’application des points de contrôle ainsi qu’aux programmes de différenciation cellulaire. Au sein de la voie RB, la fonction de p107 s’articule avec les réseaux pRB/p130 afin de moduler la répression associée à la chromatine et les décisions de prolifération. La dérégulation du contrôle exercé par la famille RB et de l’activité d’E2F est largement pertinente pour les modèles de transformation oncogénique et pour l’étude de la prolifération aberrante et de l’engagement de lignée dans les tissus de mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p107 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rbl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rbl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rbl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p107.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rbl1 pour l'étude de la signalisation de p107, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rbl1 essentiels à la fonction de p107
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rbl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p107 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le p107 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rbl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p107 plasmide HDR (m) et le p107 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rbl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rbl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.