Plásmido CRISPR de Activación (h) p107: sc-400779-ACT

El RBL1 humano codifica la proteína similar al retinoblastoma p107, una proteína de bolsillo que limita la progresión del ciclo celular al unirse a factores de transcripción E2F y coordinar la represión de genes necesarios para la entrada en la fase S. p107 integra señales procedentes de la actividad de las quinasas dependientes de ciclina y participa en las vías asociadas a RB/E2F y a puntos de control, que acoplan las señales proliferativas al control transcripcional. Mediante interacciones con reguladores de la cromatina y programas de replicación del ADN, p107 contribuye al mantenimiento de la estabilidad genómica y de los estados de diferenciación. La actividad alterada de la vía de RBL1 se asocia con una proliferación desregulada y se estudia con frecuencia en el contexto del control oncogénico del ciclo celular y de la perturbación de redes supresoras de tumores.

p107 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RBL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p107 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RBL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RBL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p107. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RBL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p107 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p107 en células tumorales con expresión de RBL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.