P-Selectin/CD62P/SELP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400441

Descripción general

SELP codifica la P-selectina (CD62P), un receptor de adhesión inducible almacenado en los gránulos alfa (α) de las plaquetas y en los cuerpos de Weibel–Palade del endotelio, y que se expone rápidamente en la superficie celular tras una estimulación inflamatoria o trombótica. La P-selectina de superficie se une a PSGL-1 en los leucocitos para mediar el anclaje y el rodamiento sobre el endotelio activado y las interacciones plaqueta–leucocito, acoplando la dinámica de adhesión a la señalización posterior que favorece el reclutamiento leucocitario y la inflamación vascular. Este eje se integra con las cascadas de adhesión mediadas por selectinas, la activación plaquetaria y las vías inflamatorias asociadas a la coagulación, moldeando la activación endotelial y el tráfico de células inmunitarias. La expresión o actividad desregulada de SELP se investiga con frecuencia en modelos de trombosis, aterosclerosis, lesión por isquemia-reperfusión y trastornos inflamatorios en los que el diálogo cruzado entre plaquetas, endotelio y leucocitos contribuye a la patología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P-Selectin/CD62P/SELP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SELP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SELP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SELP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P-Selectin/CD62P/SELP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SELP para la investigación de la señalización de P-Selectin/CD62P/SELP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SELP críticos para la función de P-Selectin/CD62P/SELP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SELP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P-Selectin/CD62P/SELP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SELP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P-Selectin/CD62P/SELP (h) y el plásmido HDR P-Selectin/CD62P/SELP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SELP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SELP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.