Particules Lentivirales d'Activation (m) Ox40: sc-423560-LAC

Le gène murin **Tnfrsf4** code **OX40 (CD134)**, une molécule de costimulation de la superfamille des récepteurs du TNF, induite sur les lymphocytes T activés et sur certains sous-ensembles de cellules lymphoïdes innées. L’engagement d’OX40 par **OX40L** favorise l’expansion clonale, la survie et la différenciation en cellules mémoire des lymphocytes T via une signalisation dépendante des **TRAF** qui active les voies **NF-κB**, **MAPK** et **PI3K/AKT**, et qui façonne les programmes de cytokines. La signalisation OX40 module l’équilibre entre **Treg** et cellules effectrices et contribue aux réactions des centres germinatifs ainsi qu’aux réponses anticorps. Une activité d’OX40 dérégulée est impliquée dans la physiopathologie inflammatoire et auto-immune, ainsi que dans la régulation immunitaire au sein des microenvironnements associés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques en immunologie.

Les particules d'activation lentivirales Ox40 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tnfrsf4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Ox40 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tnfrsf4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Ox40. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tnfrsf4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.