Partículas Lentivirales de Activación (m) OX2R: sc-425439-LAC

Cd200r1 codifica OX2R (CD200R1), un inmunorreceptor inhibidor expresado predominantemente en células de linaje mieloide, incluidos macrófagos, células dendríticas y microglía. Su interacción con su ligando CD200 atenúa la señalización inflamatoria y ayuda a mantener la homeostasis inmunitaria tisular al limitar los programas de activación aguas abajo de los receptores de la inmunidad innata y de las vías de citocinas. La regulación mediada por OX2R influye en la función de las células presentadoras de antígeno, en las respuestas fagocíticas y en el equilibrio entre la expresión génica proinflamatoria y antiinflamatoria en tejidos periféricos y en el sistema nervioso central. La señalización CD200–CD200R1 desregulada se ha relacionado con estados neuroinflamatorios alterados y patología mediada por el sistema inmunitario, lo que convierte a Cd200r1 en un objetivo útil para estudios mecanísticos del control de la inflamación.

Las partículas de activación lentiviral OX2R (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cd200r1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral OX2R (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cd200r1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de OX2R. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cd200r1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.