Plásmido CRISPR de Activación (h) OX2R: sc-404121-ACT

El CD200R1 humano codifica el inmunorreceptor inhibidor OX2R, un receptor de punto de control de la línea mieloide que se une a CD200 para limitar la activación inflamatoria. La señalización de OX2R atenúa la producción de citocinas y la maduración de las células presentadoras de antígeno mediante vías inhibitorias dependientes de fosforilación que convergen en una menor actividad de MAPK y NF-κB, modulando la comunicación entre la inmunidad innata y adaptativa. Este eje participa en la regulación de la homeostasis microglial y de las respuestas de los macrófagos periféricos, con relevancia para la evasión inmunitaria y los estados inflamatorios crónicos observados en cáncer, enfermedades autoinmunes y modelos de enfermedad neuroinflamatoria. En consecuencia, CD200R1 se estudia con frecuencia en vías que controlan la tolerancia inmunitaria, las respuestas al daño tisular y los fenotipos mieloides asociados a tumores.

OX2R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD200R1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OX2R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD200R1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD200R1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OX2R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD200R1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OX2R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OX2R en células tumorales con expresión de CD200R1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.