OTULIN Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436617

Descripción general

Otulin codifica OTULIN, una desubiquitinasa que hidroliza selectivamente cadenas de ubiquitina unidas por Met1 (lineales) generadas por el complejo LUBAC, modulando así la propagación de señales dependientes de ubiquitina. En células de ratón, OTULIN actúa como un regulador negativo clave de NF-κB y de la señalización inflamatoria al controlar la ubiquitinación lineal de componentes de la vía como RIPK1 y NEMO/IKBKG, influyendo en las respuestas de citocinas y en las decisiones de muerte celular. La alteración de OTULIN perturba la proteostasis y la homeostasis inmunitaria, vinculando esta vía con fenotipos autoinflamatorios y con mecanismos más amplios de enfermedad inflamatoria. OTULIN también se interrelaciona con la señalización inmunitaria innata y las respuestas al estrés, donde la edición de ubiquitina lineal ajusta la amplitud y la duración de la señalización desencadenada por receptores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OTULIN (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Otulin en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Otulin junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Otulin tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OTULIN.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Otulin para la investigación de la señalización de OTULIN, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Otulin críticos para la función de OTULIN
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Otulin para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OTULIN CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OTULIN CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Otulin. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OTULIN (m) y el plásmido HDR OTULIN (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Otulin para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Otulin definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.