OTUD5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424913

Visão geral

Otud5 codifica a OTUD5, uma desubiquitinase da família de tumores ovarianos (OTU) que remove cadeias de ubiquitina de proteínas-alvo para modular sua estabilidade e a saída de sinalização. A atividade de OTUD5 interage com o controle dependente de ubiquitina das respostas a danos no DNA, da sinalização imune inata e de programas transcricionais regulados por estresse, moldando como as células coordenam a ativação de checkpoints e sinais inflamatórios. Em modelos de camundongo e sistemas celulares, a perturbação da desubiquitinação associada a OTUD5 pode alterar a proteostase e o fluxo de vias em processos ligados a fenótipos relevantes para o neurodesenvolvimento e para a imunidade. Essas características tornam Otud5 um nó útil para dissecar mecanismos de edição de ubiquitina que ajustam a transdução de sinais e a integridade do genoma.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO OTUD5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Otud5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Otud5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Otud5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína OTUD5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Otud5 para a investigação da sinalização de OTUD5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Otud5 críticos para a função OTUD5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Otud5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo OTUD5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo OTUD5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Otud5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo OTUD5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR OTUD5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Otud5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Otud5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.