osteocalcin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400299

Panoramica

BGLAP codifica l’osteocalcina, una proteina secreta non collagenica dipendente dalla vitamina K, prodotta dagli osteoblasti e depositata nella matrice extracellulare ossea come importante marcatore della differenziazione osteogenica. L’osteocalcina si lega all’idrossiapatite e contribuisce alla maturazione del minerale e all’omeostasi del calcio, collegando i programmi di formazione dell’osso con l’organizzazione della matrice extracellulare. La sua espressione è coordinata con le reti regolatorie degli osteoblasti, incluse la differenziazione guidata da RUNX2 e le vie di segnalazione che accoppiano il rimodellamento osseo alla comunicazione osteoclasta–osteoblasto. Un’alterata regolazione di BGLAP/osteocalcina è spesso studiata nel contesto di fenotipi di turnover osseo, disturbi della mineralizzazione scheletrica e interazioni tra tumore e microambiente osseo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO osteocalcin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BGLAP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BGLAP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BGLAP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina osteocalcin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BGLAP per lo studio della segnalazione di osteocalcin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BGLAP critici per la funzione di osteocalcin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BGLAP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal osteocalcin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal osteocalcin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BGLAP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal osteocalcin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR osteocalcin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BGLAP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BGLAP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.