osteocalcin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400299

Descripción general

BGLAP codifica la osteocalcina, una proteína secretada, dependiente de la vitamina K, no colágena, producida por los osteoblastos y depositada en la matriz extracelular ósea como un marcador clave de la diferenciación osteogénica. La osteocalcina se une a la hidroxiapatita y contribuye a la maduración mineral y a la homeostasis del calcio, vinculando los programas de formación ósea con la organización de la matriz extracelular. Su expresión está coordinada con redes reguladoras de los osteoblastos, incluida la diferenciación impulsada por RUNX2 y vías de señalización que acoplan la remodelación ósea a la comunicación osteoclasto–osteoblasto. La regulación alterada de BGLAP/osteocalcina se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos de recambio óseo, trastornos de la mineralización esquelética e interacciones entre tumores y el microambiente óseo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO osteocalcin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BGLAP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BGLAP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BGLAP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína osteocalcin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BGLAP para la investigación de la señalización de osteocalcin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BGLAP críticos para la función de osteocalcin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BGLAP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido osteocalcin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido osteocalcin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BGLAP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR osteocalcin (h) y el plásmido HDR osteocalcin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BGLAP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BGLAP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.