Plásmido CRISPR de Activación (h) OSM: sc-404957-ACT

La oncostatina M (OSM) es una citocina pleiotrópica de la familia de la IL-6 que señaliza principalmente a través de OSMR o LIFR en combinación con gp130 para regular la inflamación, la remodelación tisular y la comunicación cruzada entre células hematopoyéticas y estromales. La estimulación con OSM activa las vías JAK/STAT (en particular STAT3), MAPK/ERK y PI3K/AKT, remodelando programas transcripcionales que influyen en la proliferación y diferenciación celular, el recambio de la matriz extracelular y la función de barrera. En biología humana, la actividad desregulada de OSM se ha relacionado con microambientes inflamatorios crónicos y remodelación fibrótica, con relevancia adicional para el estroma asociado a tumores, la señalización angiogénica y el reclutamiento de células inmunitarias. Estas características hacen de OSM un nodo útil para estudiar redes transcripcionales impulsadas por citocinas, señalización paracrina y el acoplamiento de vías entre compartimentos inmunitarios y no inmunitarios.

OSM El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OSM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OSM El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OSM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OSM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OSM. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OSM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OSM en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OSM en células tumorales con expresión de OSM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.