Plásmido CRISPR de Activación (h) OSCP: sc-404116-ACT

ATP5O codifica OSCP (proteína que confiere sensibilidad a la oligomicina), una subunidad central de la ATP sintasa mitocondrial F1Fo que estabiliza el tallo periférico y acopla la fuerza protón-motriz a la producción de ATP durante la fosforilación oxidativa. Al favorecer una generación eficiente de ATP ligada a la cadena de transporte de electrones, OSCP contribuye a la bioenergética celular, al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y a la adaptación metabólica a la disponibilidad de nutrientes y oxígeno. La alteración del ensamblaje o la regulación de la ATP sintasa puede desplazar el equilibrio redox y promover la señalización de estrés mitocondrial, con relevancia para la investigación en neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y reprogramación metabólica asociada al cáncer. Como proteína mitocondrial codificada en el núcleo, OSCP también sirve como una herramienta útil para estudiar la coordinación mitonuclear y las vías de proteostasis que afectan a la respiración.

OSCP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP5O sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OSCP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP5O en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP5O, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OSCP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP5O y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OSCP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OSCP en células tumorales con expresión de ATP5O silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.