Plasmide CRISPR/Cas9 KO ORNT1 (m): sc-422074

Présentation

Slc25a15 code le transporteur mitochondrial de l’ornithine ORNT1, membre de la famille des transporteurs SLC25, qui assure l’échange d’ornithine à travers la membrane interne mitochondriale. Chez la souris, ORNT1 soutient le cycle de l’urée en fournissant l’ornithine mitochondriale nécessaire à la carbamoylation et en facilitant le flux citrulline/ornithine, couplé à l’élimination de l’azote et au catabolisme des acides aminés. Cette activité de transport relie le métabolisme mitochondrial à la gestion cytosolique de l’azote, en influençant les réseaux métaboliques liés à l’arginine et aux polyamines. Une dérégulation du transport de l’ornithine et du flux du cycle de l’urée est associée à des phénotypes métaboliques liés à l’hyperornithinémie et peut affecter les réponses cellulaires au stress azoté.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ORNT1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc25a15 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc25a15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc25a15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ORNT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc25a15 pour l'étude de la signalisation de ORNT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc25a15 essentiels à la fonction de ORNT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc25a15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ORNT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ORNT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc25a15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ORNT1 plasmide HDR (m) et le ORNT1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc25a15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc25a15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.