Plásmido CRISPR de Activación (h) ORMDL3: sc-403587-ACT

ORMDL3 (orosomucoide‑like 3) es una proteína de membrana del retículo endoplásmico que actúa como regulador clave de la homeostasis de los esfingolípidos al modular la actividad de la serina palmitoiltransferasa, influyendo así en la producción de ceramida y en la composición lipídica de la membrana. A través de su papel en el metabolismo lipídico del RE, ORMDL3 afecta la señalización del calcio, las respuestas al estrés del RE y el tono de las vías inflamatorias, vinculando la homeostasis celular con la activación inmunitaria. La variación genética y la expresión desregulada de ORMDL3 se han asociado con la susceptibilidad al asma y otros fenotipos inflamatorios, lo que respalda su relevancia para la biología de las vías respiratorias y la inmunometabolismo. Los investigadores suelen estudiar ORMDL3 para comprender cómo la señalización impulsada por lípidos y la proteostasis del RE moldean las respuestas de citocinas, la función epitelial y los programas de adaptación al estrés.

ORMDL3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ORMDL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ORMDL3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ORMDL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ORMDL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ORMDL3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ORMDL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ORMDL3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ORMDL3 en células tumorales con expresión de ORMDL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.