Plásmido Doble Nickase (h) Orai1: sc-400901-NIC

ORAI1 codifica Orai1, la subunidad formadora del poro del canal de calcio activado por liberación de calcio (CRAC) que media la entrada de Ca²⁺ operada por depósitos tras el agotamiento de las reservas de Ca²⁺ del retículo endoplásmico. Orai1 coopera con STIM1 para acoplar la detección de Ca²⁺ en el RE con la apertura del canal en la membrana plasmática, modulando señales de calcio citosólico que regulan la transcripción dependiente de NFAT, programas de activación celular y la homeostasis del calcio. Esta vía es fundamental para la señalización de células inmunitarias, la secreción y otros procesos regulados por el calcio, como la proliferación y la migración. La actividad desregulada de ORAI1 se ha vinculado con disfunción inmunitaria y fenotipos inflamatorios, y la señalización de entrada de Ca²⁺ alterada se ha investigado en contextos que incluyen miopatías y redes de señalización asociadas al cáncer.

Orai1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ORAI1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ORAI1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ORAI1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ORAI1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.