Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Orai1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400901-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Orai1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Orai1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Orai1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ORAI1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Orai1: sc-377281
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Orai1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400901-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Orai1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400901-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ORAI1 kodiert Orai1, die porenbildende Untereinheit des Calcium-Release-Activated-Calcium-(CRAC-)Kanals, der nach Entleerung der Ca²⁺-Speicher des endoplasmatischen Retikulums (ER) den speicheroperierten Ca²⁺-Einstrom vermittelt. Orai1 wirkt mit STIM1 zusammen, um die Ca²⁺-Sensorik im ER mit der Öffnung von Kanälen in der Plasmamembran zu koppeln, und formt so zytosolische Calciumsignale, die die NFAT-abhängige Transkription, Programme der Zellaktivierung und die Calciumhomöostase regulieren. Dieser Signalweg ist zentral für die Signalübertragung in Immunzellen, Sekretion und weitere calciumregulierte Prozesse wie Proliferation und Migration. Eine dysregulierte ORAI1-Aktivität wurde mit Immunfunktionsstörungen und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht; veränderte Signalgebung durch Ca²⁺-Einstrom wurde zudem in Kontexten wie Myopathien und krebsassoziierten Signalkaskaden untersucht.
Orai1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ORAI1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ORAI1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ORAI1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ORAI1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.