Plásmido Doble Nickase (h) OPN1MW: sc-416637-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)OPN1MW consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa OPN1MW (h) y el plásmido de doble nickasa OPN1MW (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a OPN1MW. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) OPN1MW | sc-416637-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) OPN1MW | sc-416637-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1MW codifica la opsina sensible a longitudes de onda medias (opsina M), un receptor acoplado a proteína G de los fotorreceptores cono que se une al 11‑cis‑retinal e inicia la fototransducción en respuesta a la luz verde. Tras su activación, pone en marcha la cascada de señalización transducina de cono (GNAT2)–PDE6, disminuyendo el cGMP y regulando la actividad de los canales iónicos dependientes de cGMP para controlar el potencial de membrana y la salida sináptica en los conos de la retina. La expresión y localización adecuadas de OPN1MW sostienen la estructura del segmento externo de los conos y la discriminación del color, vinculándolo a procesos centrales de la señalización visual y la fisiología retiniana. La variación genética o la desregulación de OPN1MW se asocia con deficiencias hereditarias de la visión del color y fenotipos relacionados con la función de los conos, lo que lo hace relevante para estudios del desarrollo de la retina, el tráfico de opsinas y la integridad de las redes de fototransducción.
OPN1MW El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus OPN1MW en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de OPN1MW. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de OPN1MW. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con OPN1MW alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.