OMP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403257-ACT

L’OMP umano (olfactory marker protein, proteina marcatore olfattiva) codifica una piccola proteina citosolica altamente arricchita nei neuroni sensoriali olfattivi maturi, dove supporta la trasduzione del segnale evocata dagli odori e la maturazione neuronale. OMP modula la dinamica dei secondi messaggeri intracellulari, inclusi processi dipendenti da cAMP e da Ca2+, influenzando la cinetica della risposta e l’adattamento nella via olfattiva. Le alterazioni dell’espressione di OMP sono ampiamente utilizzate come indicatore dello stato di differenziamento dei neuroni olfattivi e dell’integrità dei circuiti negli studi di neurobiologia sensoriale. La disregolazione della funzione e della maturazione dei neuroni olfattivi è rilevante per le ricerche su iposmia/anosmia e, più in generale, in contesti neuroevolutivi o neurodegenerativi in cui i deficit olfattivi possono costituire un fenotipo misurabile.

OMP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OMP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OMP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OMP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OMP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OMP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OMP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OMP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OMP nelle cellule tumorali con espressione di OMP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.