Partículas Lentivirales de Activación (m) Olfr1261: sc-434614-LAC

Olfr1261 codifica un receptor olfatorio en ratón que pertenece a la superfamilia de GPCR de clase A (tipo rodopsina) y se predice que se acopla a la señalización mediada por proteínas G en neuronas quimiosensoriales. En la vía canónica de transducción olfatoria, la activación del receptor por odorantes promueve la producción de AMPc dependiente de Golf/ADCY3 y la actividad posterior de los canales regulados por nucleótidos cíclicos, conectando la activación del receptor con la despolarización neuronal y con programas génicos dependientes de la actividad. Aunque se asocia principalmente con la detección de olores, miembros de la familia de receptores olfatorios también pueden presentar expresión ectópica en tejidos no olfatorios, donde la señalización GPCR puede influir en el metabolismo celular, la diferenciación o la señalización inflamatoria de maneras dependientes del contexto. Las alteraciones en la señalización de receptores olfatorios y en sus patrones de expresión se exploran con frecuencia como biomarcadores del estado neuronal y en modelos de disfunción sensorial relevantes para la neurodegeneración y estudios de exposición ambiental.

Las partículas de activación lentiviral Olfr1261 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Olfr1261 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Olfr1261 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Olfr1261, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Olfr1261. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Olfr1261 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.