Odf1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405840

Descripción general

ODF1 codifica la proteína 1 de las fibras densas externas (Odf1), un componente estructural enriquecido en el testículo de las fibras densas externas de la cola del espermatozoide, que contribuye a la estabilidad del axonema y al retroceso elástico durante el batido del flagelo. Odf1 participa en la espermiogénesis y en el ensamblaje tardío del espermatozoide, contribuyendo a la organización del citoesqueleto y a la integridad mecánica de la pieza principal. La alteración de la arquitectura de la cola del espermatozoide dependiente de ODF1 se asocia con motilidad reducida y fenotipos de infertilidad por factor masculino, por lo que es relevante para estudiar los mecanismos de la astenozoospermia y otros defectos espermatogénicos relacionados. Su perfil de expresión restringido y su función especializada proporcionan un modelo acotado para investigar la regulación dependiente de la diferenciación de proteínas del citoesqueleto en células germinales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Odf1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ODF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ODF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ODF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Odf1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ODF1 para la investigación de la señalización de Odf1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ODF1 críticos para la función de Odf1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ODF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Odf1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Odf1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ODF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Odf1 (h) y el plásmido HDR Odf1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ODF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ODF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.