ODC Plasmide Double Nickase (m): sc-422006-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ODC Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ODC Double Nickase Plasmid (m) e il ODC Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Odc1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ODC Antibody (E-6): sc-398116
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ODC Plasmide Double Nickase (m) | sc-422006-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ODC Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422006-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Odc1 codifica l’ornitina decarbossilasi (ODC), l’enzima limitante nella biosintesi delle poliammine che converte l’ornitina in putrescina, sostenendo la produzione di spermidina e spermina. L’attività di ODC integra segnali metabolici e di crescita per regolare proliferazione, traduzione e dinamica della cromatina, con un controllo stringente tramite feedback mediato dall’antizima e degradazione proteasomiale. Alterazioni di Odc1 influenzano processi dipendenti dalle poliammine, inclusi progressione del ciclo cellulare, risposte allo stress e differenziamento, rendendolo rilevante per studi su programmi di crescita deregolati e rimodellamento metabolico.
ODC Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Odc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Odc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Odc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Odc1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.