Plásmido Doble Nickase (h) ODC: sc-401055-NIC

El ODC1 humano codifica la ornitina descarboxilasa (ODC), la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de poliaminas que cataliza la descarboxilación de la ornitina para generar putrescina, impulsando la producción de espermidina y espermina. Mediante el control de las reservas intracelulares de poliaminas, la ODC influye en la replicación del ADN, la dinámica de la cromatina, la traducción y la progresión del ciclo celular, integrándose con la señalización sensible a factores de crecimiento y con programas de estrés metabólico. La actividad de la ODC está estrictamente regulada a nivel de la transcripción, la degradación mediada por antienzima y la retroalimentación por metabolitos de poliaminas, lo que convierte a ODC1 en un nodo clave de la homeostasis celular. La desregulación del metabolismo de poliaminas y la expresión alterada de ODC1 se han asociado con estados proliferativos e inflamatorios y se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en estudios de remodelación metabólica.

ODC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ODC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ODC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ODC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ODC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.