Plasmide CRISPR d'Activation (h) OCT3: sc-402959-ACT

SLC22A3 code le transporteur de cations organiques 3 (OCT3), un transporteur membranaire plasmique polysubstrat qui assure le transport bidirectionnel de monoamines endogènes et de divers cations organiques xénobiotiques, de manière indépendante du sodium. OCT3 influence la captation cellulaire et la clairance des catécholamines et d’autres amines bioactives, contribuant ainsi à l’homéostasie des neurotransmetteurs, à la signalisation du stress et au tonus inflammatoire local dans des tissus tels que le cerveau, le cœur, le foie et le placenta. En régulant l’exposition intracellulaire aux métabolites et aux médicaments cationiques, OCT3 affecte les processus de transport membranaire, la bioénergétique cellulaire et la variabilité pharmacocinétique. Une expression altérée de SLC22A3 ou des variations génétiques ont été associées à des phénotypes cardiométaboliques et neuropsychiatriques, et pourraient moduler la susceptibilité à des maladies complexes via des modifications de la prise en charge des monoamines et de l’activité du transporteur selon les tissus.

OCT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC22A3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OCT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC22A3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC22A3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OCT3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC22A3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OCT3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OCT3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC22A3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.