Plásmido CRISPR de Activación (h) OCT1: sc-402232-ACT

SLC22A1 codifica el transportador de cationes orgánicos 1 (OCT1), un transportador de solutos polispecífico que media la captación, independiente de sodio, de aminas endógenas y de diversos cationes orgánicos xenobióticos a través de la membrana plasmática. La actividad de OCT1 determina el destino celular de metabolitos y fármacos cargados, influye en el manejo hepático de compuestos circulantes y contribuye a la variabilidad interindividual en la farmacocinética dependiente del transporte. Al controlar la disponibilidad intracelular de sustratos catiónicos, OCT1 se conecta con vías de desintoxicación y de homeostasis metabólica, incluidos procesos que modulan el estrés oxidativo y la función mitocondrial. La alteración de la expresión de SLC22A1 o la variación genética se ha asociado con diferencias en la respuesta a fármacos y se ha investigado en trastornos hepáticos y en biología del cáncer como un determinante de la captación mediada por transportadores.

OCT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC22A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OCT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC22A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC22A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OCT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC22A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OCT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OCT1 en células tumorales con expresión de SLC22A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.