Plásmido CRISPR de Activación (h) Oct-1: sc-401156-ACT

El gen humano **POU2F1** codifica el factor de transcripción con dominio POU **Oct-1**, un regulador de expresión ubicua que se une a motivos octámero para coordinar programas de expresión génica basales y sensibles a estímulos. Oct-1 participa en el control transcripcional mediado por la ARN polimerasa II, en la remodelación de la cromatina y en la integración dependiente del contexto de señales que influyen en la proliferación, la diferenciación y las respuestas celulares al estrés. A través de interacciones con elementos promotores y potenciadores (enhancers), ayuda a ajustar vías vinculadas a la regulación de genes inmunitarios e inflamatorios, las respuestas al daño del ADN y la adaptación metabólica. La actividad desregulada de Oct-1 y los patrones alterados de expresión de **POU2F1** se han asociado con cambios en redes transcripcionales observados en múltiples contextos de enfermedad, incluidos fenotipos oncogénicos e inmunorrelacionados, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación génica.

Oct-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POU2F1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Oct-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POU2F1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POU2F1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Oct-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POU2F1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Oct-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Oct-1 en células tumorales con expresión de POU2F1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.