Oct-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401156-ACT

O POU2F1 humano codifica o fator de transcrição com domínio POU Oct-1, um regulador expresso de forma ubíqua que se liga a motivos octâmeros para coordenar programas de expressão gênica basais e responsivos a estímulos. O Oct-1 participa do controle transcricional mediado pela RNA polimerase II, do remodelamento da cromatina e da integração dependente do contexto de sinais que influenciam a proliferação, a diferenciação e as respostas ao estresse celular. Por meio de interações com elementos promotores e intensificadores (enhancers), ele ajuda a modular vias ligadas à regulação de genes imunes e inflamatórios, às respostas a danos no DNA e à adaptação metabólica. A atividade desregulada do Oct-1 e padrões alterados de expressão de POU2F1 têm sido associados a mudanças em redes transcricionais observadas em múltiplos contextos de doença, incluindo fenótipos oncogênicos e relacionados ao sistema imune, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de regulação gênica.

Oct-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU2F1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Oct-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU2F1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU2F1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Oct-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU2F1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Oct-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Oct-1 em células tumorais com expressão de POU2F1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.