OC-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404081-ACT

ONECUT2 (OC-2) kodiert einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Festlegung von Zelllinien und Differenzierungsprogramme reguliert, insbesondere in endodermalen und epithelialen Kontexten. Als DNA-bindender Regulator koordiniert OC-2 Transkriptionsnetzwerke, die Zellidentität, Proliferation und entwicklungsbiologische Musterbildung steuern, und interagiert dabei mit der übergeordneten Chromatin- und Transkriptionsmaschinerie. Eine dysregulierte ONECUT2-Expression wurde mit veränderten Genexpressionszuständen in Verbindung gebracht, die mit onkogenen Phänotypen assoziiert sind, darunter Veränderungen der Wachstumskontrolle, invasionsbezogene Programme und zelluläre Plastizität. Diese Eigenschaften machen ONECUT2 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung transkriptioneller Schaltkreise, epigenetischer Regulation und krankheitsrelevanter Zustandsübergänge in humanen Zellmodellen.

OC-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ONECUT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OC-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ONECUT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ONECUT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OC-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ONECUT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OC-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OC-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ONECUT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.