OATP-H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404706

Übersicht

SLCO4C1 kodiert das menschliche organische Anionentransportpolypeptid OATP‑H (OATP4C1), einen multispezifischen Solute-Carrier, der die natriumunabhängige Aufnahme einer Reihe endogener Metabolite sowie xenobiotikaähnlicher organischer Anionen über Zellmembranen vermittelt. Dieser Transporter trägt zu transmembranen Transportprozessen bei, die die zelluläre Exposition gegenüber zirkulierenden Verbindungen mitbestimmen und nachgeschaltete Stoffwechsel- und Entgiftungswege beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Aktivität von OATP‑Familienmitgliedern wurde mit Änderungen der Gewebeverteilung von Substraten und Störungen der metabolischen Homöostase in Verbindung gebracht, wodurch SLCO4C1 ein nützliches Ziel für die Untersuchung transportgetriebener Phänotypen ist. In der biomedizinischen Forschung ermöglicht die gezielte Veränderung von SLCO4C1 eine mechanistische Analyse von Transporter‑Substrat‑Beziehungen und deren Auswirkungen auf Zellsignalwege und Stressantworten.

Das OATP-H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLCO4C1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLCO4C1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLCO4C1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OATP-H-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLCO4C1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OATP-H-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLCO4C1-Exone abzielen, die für die OATP-H-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLCO4C1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OATP-H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom OATP-H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLCO4C1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OATP-H HDR-Plasmid (h) und OATP-H HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLCO4C1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLCO4C1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.