OAT3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422696

Übersicht

Slc22a8 kodiert den organischen Anionentransporter 3 (OAT3), einen basolateral lokalisierten, polyspezifischen Aufnahmetransporter, der den zellulären Import verschiedener endogener Metaboliten sowie xenobiotischer organischer Anionen vermittelt. Im proximalen Tubulus der Mausniere unterstützt OAT3 die gerichtete Sekretion, indem er die Aufnahme aus dem Blut mit nachgeschalteten apikalen Efflux-Transportern koppelt und so die renale Clearance und die systemische Exposition gegenüber vielen kleinen Molekülen mitprägt. Durch seinen Einfluss auf den Austausch organischer Anionen und die intrazelluläre Metabolitenverarbeitung trägt OAT3 zur Soluthomöostase bei und steht in Verbindung mit Signal- und Transportwegen, die den tubulären Transport, die Elimination urämischer Toxine und die Anfälligkeit für Nephrotoxizität betreffen. Eine veränderte OAT3-Aktivität wurde mit Mechanismen der Nierenschädigung und pharmakokinetischer Variabilität in Zusammenhang gebracht, wodurch Slc22a8 ein geeigneter Lokus zur Modellierung transporterabhängiger Phänotypen ist.

Das OAT3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc22a8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc22a8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc22a8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OAT3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc22a8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OAT3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc22a8-Exone abzielen, die für die OAT3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc22a8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OAT3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OAT3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc22a8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OAT3 HDR-Plasmid (m) und OAT3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc22a8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc22a8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.