Plasmide Double Nickase (h) NY-ESO-1: sc-418340-NIC

CTAG1B code NY-ESO-1, un antigène cancer/testis dont l’expression est très restreinte dans les tissus normaux adultes et fréquemment ectopique dans de nombreux types de tumeurs. Des peptides dérivés de NY-ESO-1 sont traités par le protéasome puis présentés par les complexes du CMH de classe I et II, reliant l’expression de CTAG1B aux voies de traitement et de présentation de l’antigène ainsi qu’à l’immunogénicité tumorale. Son expression est souvent associée à une dérégulation épigénétique, notamment une hypométhylation de l’ADN et un remodelage de la chromatine, et elle est utilisée comme marqueur pour étudier les programmes de réactivation de gènes de la lignée germinale dans les cancers. Les travaux sur CTAG1B/NY-ESO-1 soutiennent des recherches sur le contrôle transcriptionnel, les mécanismes de reconnaissance immunitaire et les phénotypes cellulaires associés à l’expression d’antigènes liés aux tumeurs.

NY-ESO-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTAG1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTAG1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTAG1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTAG1B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.